细胞冻存是细胞生存的重要要领之一。使用冻存技能将细胞置于-196~C液氮中低温生存，可以使细胞临时离开生长状态而将其细胞特性生存起来，如许在必要的时间再苏醒细胞用于实行。并且适度地生存肯定量的细胞，可以防备因正在造就的细胞被污染或其他不测变乱而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。除此之外，还可以使用细胞冻存的情势来购置、寄赠、互换和运送某些细胞。细胞冻存时向造就基中参加掩护剂——终浓度5%~15%的甘油或二甲基亚砜(DMSO)，可使溶液冰点低落，加之在迟钝冻结条件下，细胞内水分透出，淘汰了冰晶形成，从而制止细胞毁伤。尺度冷冻速率开始为-1到-2℃/min，当温度低于-25℃时可加快，到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。
　　
　　现在常用的掩护剂为二甲亚砜(DMSO)和甘油，它们对细胞无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞。
　　
　　实行步调
　　
　　1.消化细胞，将细胞悬液网络至离心管中。
　　
　　2.1000rpm离心10分钟，弃上清液。
　　
　　3.沉淀加含掩护液的造就，计数，调解至5106/ml左右。
　　
　　4.将悬液分至冻存管中，每管1ml。
　　
　　5.将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口，封口肯定要严，不然苏醒时易出现爆裂。
　　
　　6.贴上标签，写明细胞种类，冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。
　　
　　7.按下列次序降温：室温→4℃(20分钟)→冰箱冷冻室(30分钟)→低温冰箱(-30℃1小时)→气态氮(30分钟)→液氮。
　　
　　细致：操纵时应警惕，以免液氮冻伤。液氮定期查抄，随时增补，不克不及挥发洁净，一样通常30立升的液氮能用1～1.5月。